印跡技術(shù)簡介
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印跡技術(shù)是指將待測(cè)核酸分子結(jié)合到一定固相支持物上的方法。
southern印跡，將電泳分離的DNA片段轉(zhuǎn)移到一定的固相支持物上的過程。
DNA分子被限制酶切，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，將DNA片段按照分子量大小分離，然后將含DNA片段的瓊脂糖凝膠變性，將其中單鏈DNA轉(zhuǎn)移到硝酸纖維濾膜或者其他固相支持物上。而DNA片段的相對(duì)位置保持不變。可做下一步雜交反應(yīng)。
northern印跡，將RNA變性及電泳分離后，將其轉(zhuǎn)移到固相支持物上的過程。
western印跡
也稱Western免疫印跡（WesternBlot或WesternBlotting），是指將蛋白質(zhì)樣品經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，然后轉(zhuǎn)移至到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，然后用抗體通過免疫學(xué)反應(yīng)檢測(cè)目的蛋白，分析基因的表達(dá)程度。能用堿變性，防止水解。用甲醛變性。
southern印跡的步驟
1.從組織中提取DNA
2.用特定的核酸內(nèi)切酶酶切
3.瓊脂糖凝膠電泳
4.堿變性
5.中和反應(yīng)
6.轉(zhuǎn)膜
7.固定
8.雜交
9.雜交信號(hào)檢測(cè)
northern印跡的步驟:
1.從細(xì)胞中提取總RNA
2.甲醛凝膠變性電泳
3.轉(zhuǎn)膜
4.固定
5.雜交
6.雜交信號(hào)檢測(cè)
western印跡的步驟
1.蛋白質(zhì)樣品制備
2.SDS-PAGE電泳
3.轉(zhuǎn)膜
4.封閉
5.一抗孵育
6.二抗孵育
7.顯色
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